Самый смертоносный грипп: полная история открытия и реконструкции пандемического вируса 1918 года

Самый смертоносный грипп: полная история открытия и реконструкции пандемического вируса 1918 года

Дуглас Джордан при участии доктора Терренса Тумпи и Барбары Джестер

На этой странице

• История вопроса : смертельное наследие пандемии 1918 года и его значение для глобальных усилий по подготовке к будущим угрозам пандемии.
• Часть 1 - Обнаружение пропавшего убийцы : история о том, как охотник за вирусами всю жизнь стремился обнаружить самый смертоносный вирус пандемического гриппа в истории человечества.
• Часть 2 - Построение чертежа : история о том, как группа американских ученых расшифровала и собрала геном вируса 1918 года.
• Часть 3 - Реконструкция : история о том, как микробиолог CDC реконструировал живой пандемический вирус 1918 года в защищенной лаборатории CDC, чтобы раскрыть его секреты и защититься от будущих пандемий.
• Часть 4 - Уроки прошлого : как мир развивался после пандемии 1918 года и проблемы, связанные с будущими пандемиями.
• Рекомендации

 

100-летняя годовщина пандемии 1918 года и 10-летняя годовщина пандемии H1N1 2009 года являются вехами, которые дают возможность поразмышлять о новаторской работе, которая привела к открытию, секвенированию и реконструкции вируса пандемического гриппа 1918 года. Эти совместные усилия позволили углубить понимание самой смертоносной пандемии гриппа в современной истории и помогли мировому сообществу общественного здравоохранения подготовиться к современным пандемиям, таким как H1N1 2009 года, а также к будущим угрозам пандемии.

Пандемия гриппа H1N1 1918 года, иногда называемая «испанским гриппом», унесла жизни примерно 50 миллионов человек во всем мире, в том числе примерно 675 000 человек в Соединенных Штатах. ^1,2,3,4 Необычной характеристикой этого вируса была высокая смертность здоровых взрослых в возрасте от 15 до 34 лет. ³ Пандемия снизила среднюю продолжительность жизни в США более чем на 12 лет. ³ Сравнимый уровень смертности не наблюдался ни в один из известных сезонов гриппа или пандемий, которые произошли до или после пандемии 1918 года. ³

Уникальная серьезность вируса озадачивала исследователей на протяжении десятилетий и вызвала ряд вопросов, таких как «Почему вирус 1918 года был таким смертоносным?», «Откуда произошел вирус?» И «Что сообщество общественного здравоохранения может извлечь из опыта 1918 года. вирус, чтобы лучше подготовиться к будущим пандемиям и защититься от них? » Эти вопросы побудили группу экспертов и исследователей вирусов к поиску потерянного вируса 1918 года, секвенированию его генома, воссозданию вируса в строго безопасной и регулируемой лаборатории CDC​ и, в конечном итоге, к изучению его секретов, чтобы лучше подготовиться к будущим пандемиям. Ниже приводится исторический отчет об этих усилиях со ссылками и описанием вклада всех замечательных мужчин и женщин.

 

Обнаружение пропавшего убийцы

​

Место массового захоронения в Миссии Бревиг, Аляска, где 72 из 80 взрослых жителей маленькой деревни были похоронены после того, как умерли от смертельного пандемического вируса 1918 года. Фото: Энджи Буш Алстон.

В течение десятилетий вирус 1918 года был утерян для истории, пережиток времени, когда понимание инфекционных патогенов и инструменты для их изучения были еще только зарождались. После пандемии 1918 года поколениям ученых и экспертов в области общественного здравоохранения остались только эпидемиологические доказательства летальности пандемического вируса 1918 года и его пагубного воздействия на население мира. Небольшая деревня на берегу океана на Аляске под названием Миссия Бревиг станет как свидетельством этого смертоносного наследия, так и решающим фактором в конечном открытии вируса 1918 года.

Сегодня в Бревигской миссии проживает менее 400 человек, но осенью 1918 года там проживало около 80 взрослых, в основном коренные жители инуитов. Хотя существуют разные рассказы о том, как вирус 1918 года попал в небольшую деревню - будь то торговцы из соседнего города, которые путешествовали на собачьих упряжках, или даже местный курьер, - его влияние на население деревни хорошо задокументировано. За пятидневный период с 15 по 20 ноября 1918 года пандемия 1918 года унесла жизни 72 из 80 взрослых жителей села.

Позже, по распоряжению местных властей, на холме рядом с деревней было создано место массового захоронения, отмеченное только маленькими белыми крестами - мрачный памятник общине, почти полностью исчезнувшей из жизни. Могила была заморожена в вечной мерзлоте и оставалась нетронутой до 1951 года. В том же году Йохан Хултин, 25-летний шведский микробиолог и доктор философии. студент Университета Айовы, отправился в экспедицию в Миссию Бревиг в надежде найти вирус 1918 года и в процессе найти новые идеи и ответы. Халтин считал, что в этом сохранившемся могиле он все еще может найти следы самого вируса 1918 года, замороженные во времени в тканях жителей деревни, жизни которых он унес.

В 1951 году Халтин успешно получил разрешение от деревенских старейшин на раскопки могильника Бревигской миссии. С помощью нескольких своих университетских коллег Халтин устроил раскопки над могилой. На раскопки ушли дни, так как Халтину пришлось разводить костры, чтобы растопить землю достаточно, чтобы можно было копать. Два дня спустя Халтин наткнулся на тело маленькой девочки - ее тело все еще сохранилось в синем платье, а волосы были украшены красными лентами ⁵ . В конце концов, Халтин успешно получил легочную ткань еще четырех тел, захороненных на этом месте, но материально-технические и технологические ограничения временного периода оказались бы огромными.

В разговоре, который Халтин провел десятилетия спустя с микробиологом CDC доктором Терренсом Тумпи (см. Часть III - реконструкция), Халтин объяснил, как во время обратного перелета с Аляски в Университет Айовы он летал на винтовом самолете DC-3. который был вынужден сделать несколько остановок по пути для дозаправки. Во время каждой остановки Халтин - всегда находчивый - выходил из самолета и пытался повторно заморозить образцы легких, используя углекислый газ из огнетушителя.

Шум, производимый этой деятельностью, по-видимому, вызывал недоуменные взгляды попутчиков и посторонних. Вернувшись в Айову, Халтин попытался ввести ткань легкого в куриные яйца, чтобы заставить вирус расти. ⁵ Не получилось. В конце концов, что неудивительно, Халтин не смог извлечь вирус 1918 года с этой первоначальной попытки.

 

Лишь 46 лет спустя, в 1997 году, Халтин получит еще одну возможность заняться исследованием вируса 1918 года. В том же году Халтин наткнулся на статью в журнале Science, написанную Джеффри Таубенбергером и др. под названием «Первоначальная генетическая характеристика« испанского »вируса гриппа 1918 года». ⁶ В то время доктор Таубенбергер был молодым молекулярным патологом, работавшим в Институте патологии вооруженных сил в Вашингтоне, округ Колумбия.

В статье Таубенбергер и его команда описали свою первоначальную работу по секвенированию части генома вируса 1918 года. Геном - это полный список генетических инструкций, из которых состоит организм, подобный плану, используемому для построения. Многие люди знакомы с концепцией ДНК, которая является двухцепочечной и определяет фундаментальные генетические характеристики почти всех живых существ. Однако геном вируса гриппа состоит из одноцепочечной РНК. Команда Таубенбергера успешно извлекла РНК вируса 1918 года из легочной ткани, полученной от 21-летнего военнослужащего из США, базирующегося в Форт-Джексоне, Южная Каролина. Военнослужащий был госпитализирован 20 сентября 1918 года с диагнозом: грипп и пневмония. Он умер шесть дней спустя, 26 сентября 1918 г.и образец его легочной ткани был собран и сохранен для дальнейшего изучения.

Из этой ткани группа Таубенбергера смогла секвенировать девять фрагментов вирусной РНК из четырех из восьми генных сегментов вируса. Эта работа не представляла полную последовательность всего генома вируса 1918 года, но она предоставила более четкую картину пандемического вируса, чем когда-либо прежде. Основываясь на данных о последовательности вируса 1918 года, собранных Таубенбергером в 1997 году, он и его коллеги-исследователи первоначально заявили, что вирус 1918 года был новым вирусом гриппа A (H1N1), который принадлежал к подгруппе вирусов, полученных от людей и свиней, в отличие от вирусов. птицы. ⁶ Однако еще многое предстоит узнать о вирусе.

Прочитав статью Таубенбергера, Халтин снова вдохновился попыткой восстановить вирус 1918 года. Халтин написал письмо Таубенбергеру, в котором спрашивал, будет ли Таубенбергер заинтересован в том, может ли он вернуться в миссию Бревиг и получить ткани легких жертв вируса 1918 года, захороненных в вечной мерзлоте Аляски. Во время обратного телефонного звонка Таубенбергер ответил утвердительно. Неделю спустя Халтин снова отправился в миссию Бревиг с скудными инструментами для выполнения этой задачи. Он одолжил садовые ножницы своей жены, чтобы помочь в раскопках.

Сорок шесть лет прошло с момента первого посещения Халтина могилы, и теперь ему было 72 года. Он еще раз попросил разрешения на раскопки могилы у сельского совета, которое он получил, и он также нанял местных жителей для помощи в работе. Халтин сам оплатил поездку, личные расходы составили около 3200 долларов. ⁷ Раскопки заняли около пяти дней, но на этот раз Халтин сделал замечательную находку.

В вечной мерзлоте глубиной около 7 футов было похоронено и сохранилось тело инуитской женщины, которую Халтин назвал «Люси». Люси, как узнал Халтин, была тучной женщиной, которая, вероятно, умерла в возрасте около 20 лет из-за осложнений, вызванных вирусом 1918 года. Ее легкие были совершенно заморожены и сохранились в вечной мерзлоте Аляски. Халтин удалил их, поместил в консервирующую жидкость, а затем отправил их отдельно Таубенбергеру и его коллегам-исследователям, включая доктора Энн Рид, в Институт патологии вооруженных сил. ⁵ Десять дней спустя Халтину позвонили ученые, чтобы подтвердить - возможно, к всеобщему удивлению, - что положительный генетический материал вируса 1918 года действительно был получен из ткани легких Люси.

 

Создание чертежа

Это изображение вируса гриппа. Гемагглютинин (НА) - это поверхностный белок вируса, который играет роль в обеспечении проникновения вируса гриппа и инфицирования здоровой клетки. Фото: Дэн Хиггинс, CDC.

Первоначальный эффект этого открытия будет сначала описан в статье, опубликованной в феврале 1999 г. в журнале Proceedings of the National Academy of Science (PNAS), озаглавленной «Происхождение и эволюция гена гемагглютинина« испанского »вируса гриппа 1918 г.» Энн Рейд и др. . ⁸ Халтин признан соавтором. В статье авторы описали свои усилия по секвенированию (т.е. характеристике) гена гемагглютинина «НА» вируса 1918 года.

Ген НА вируса гриппа определяет свойства поверхностных белков НА вируса. Эти поверхностные белки НА позволяют вирусу гриппа проникать в здоровые клетки дыхательных путей и инфицировать их. НА также нацелены антитела, вырабатываемые иммунной системой для борьбы с инфекцией. Современные вакцины против гриппа действуют, нацеливая на уникальный HA вируса гриппа (факт, который вирусолог доктор Питер Палезе, о котором говорится далее в этой статье, помогал первооткрывателю).

В исследовании 1999 года авторам удалось секвенировать полную последовательность гена НА вируса 1918 года. Для этого авторы использовали фрагменты РНК вируса, полученные из тел ранее описанного 21-летнего военнослужащего Форт-Джексона, «Люси» из миссии Бревик, и третьего человека, 30-летнего мужчины-военнослужащего. служил в Кэмп Аптон, Нью-Йорк. Этот человек был госпитализирован в лагерную больницу с гриппом 23 сентября 1918 года, у него было быстрое клиническое течение болезни, и он умер от острой дыхательной недостаточности 26 сентября 1918 года.

Результаты секвенирования показали, что предок вируса 1918 года инфицировал людей где-то между 1900 и 1915 годами. Рейд и Таубенбергер отметили, что ген НА 1918 года имел адаптацию у ряда млекопитающих, а не у птиц, и был более похож на человека или свинью в зависимости от метода анализа. Филогенетический анализ, который используется для группировки вирусов гриппа в соответствии с их эволюционным развитием и разнообразием, поместил HA вируса 1918 года внутри и вокруг корня клады млекопитающих. Это означает, что он, вероятно, был предком или тесно связан с самыми ранними вирусами гриппа, которые, как известно, заражали млекопитающих. Однако авторы полагали, что вирус, вероятно, получил свой HA от птичьих вирусов, но не были уверены, как долго вирус мог адаптироваться в организме-хозяине-млекопитающем, прежде чем проявиться в пандемической форме.

По словам авторов, существующим штаммом, с которым наиболее тесно связаны последовательности вируса 1918 г., был «A / sw / Iowa / 30», самый старый классический штамм гриппа свиней. Авторы отметили, что современные штаммы вируса птичьего гриппа сильно отличаются от пандемического вируса 1918 года, и, к сожалению, более старые штаммы птичьего гриппа, появившиеся примерно во время пандемии 1918 года, не были доступны для изучения. Авторы также отметили, что HA1 вируса 1918 года имеет только четыре сайта гликозилирования, что отличается от современных HA человека, которые накапливают до пяти дополнительных сайтов гликозилирования в процессе антигенного дрейфа. Антигенный дрейф относится к небольшим изменениям в генах вирусов гриппа, которые происходят непрерывно с течением времени по мере того, как вирус копирует себя.Антигенный дрейф - одна из причин, почему каждый год случается сезон гриппа, а также причина того, почему люди могут заразиться гриппом несколько раз в своей жизни.

Считается, что сайты гликозилирования необходимы для функционирования вирусов гриппа, а включение дополнительных сайтов гликозилирования считается адаптацией вируса к человеку-хозяину. Также следует отметить, что авторы не обнаружили никаких генетических изменений в HA вируса 1918 года, которые могли бы объяснить его исключительную вирулентность.

В отличие от современных вирулентных штаммов птичьего гриппа, таких как вирусы птичьего гриппа A (H5) и (H7), HA вируса 1918 г. не обладал мутацией «сайта расщепления», которая является признанным генетическим маркером вирулентности, т. Е. Тяжести или вредоносность болезни. Вставка аминокислот в сайт расщепления НА может позволить вирусу гриппа расти в тканях за пределами его нормальных клеток-хозяев. В отсутствие таких очевидных маркеров доктор Рид и ее коллеги пришли к выводу, что, вероятно, существует несколько генетических факторов, ответственных за серьезность вируса 1918 года.

 

Микробиолог доктор Питер Палезе и его команда создали плазмиды, которые использовал доктор Терренс Тумпи для реконструкции пандемического вируса 1918 года. У Палезе много достижений, в том числе создание первых генетических карт вирусов гриппа A, B и C, а также определение механизма, используемого большинством современных противовирусных препаратов от гриппа. Фото: Википедия (https://en.wikipedia.org/wiki/Peter_Palese)

В последующем документе, опубликованном в июне 2000 г., под названием «Характеристика гена нейраминидазы вируса гриппа 1918 г.« Испании »описывается секвенирование гена нейраминидазы (NA) вируса 1918 г. ⁹ В вирусе гриппа ген нейраминидазы отвечает за кодирование поверхностных белков NA вируса (см. Предыдущее изображение вируса для справки). Поверхностные белки NA вируса гриппа позволяют вирусу гриппа вырваться из инфицированной клетки и инфицировать другие клетки. Следовательно, он играет важную роль в распространении инфекции гриппа. Автор отметил, что NA также является мишенью для иммунной системы, и что антитела против NA не предотвращают инфекцию, но они значительно ограничивают способность вируса распространяться.

Следует отметить, что авторам удалось секвенировать весь код NA вируса 1918 года из образца вируса, полученного из тела «Люси». Так что и здесь работа Халтина оказалась бесценной. Авторы обнаружили, что ген NA вируса 1918 г. имеет много общих последовательностей и структурных характеристик со штаммами вируса гриппа млекопитающих и птиц. ⁹ Филогенетический анализ показал, что ген NA вируса 1918 года был промежуточным образом расположен между млекопитающими и птицами, предполагая, что он, вероятно, был введен млекопитающим незадолго до пандемии 1918 года. Кроме того, NA вируса 1918 года, полученная от Люси, предполагает, что он очень похож на предка всех последующих изолятов свиней и людей. ⁹

В целом филогенетический анализ, по-видимому, показал, что конечный источник NA вируса 1918 года был птичьим по своей природе, но авторы не смогли определить путь от птичьего источника до окончательной пандемической формы вируса. Что касается генетических особенностей NA, которые могли объяснить серьезность вируса 1918 года, исследователи снова не смогли найти ни одной единственной особенности NA 1918 года, которая способствовала вирулентности вируса. ⁹ Например, в некоторых современных вирусах гриппа потеря сайта гликозилирования в NA по аминокислоте 146 (в WSN / 33) способствует вирулентности, а также приводит к тому, что вирус атакует нервную систему мышей. Однако это изменение не было обнаружено в NA вируса 1918 г.

После этого исследования был опубликован ряд дополнительных исследований, в каждом из которых подробно описывались результаты по каждому из оставшихся генов вируса 1918 года (всего у вирусов гриппа 8 генов). В 2001 году в статье Кристофера Баслера и др. опубликованный в Proceedings of the National Academic of Science (PNAS), описал секвенирование неструктурного (NS) гена вируса 1918 года. ¹⁰ Исследование Ann Reid et al., Опубликованное в 2002 году в Journal of Virology. описали секвенирование матричного гена вируса. ¹¹ Два года спустя в исследовании Journal of Virology 2004 года было описано секвенирование гена нуклеопротеина (NP) вируса 1918 года. ¹² В 2005 году гены полимеразы вируса были секвенированы Таубенбергером и др. И описаны в статье Nature. ¹³ Это последнее исследование завершило почти десятилетний процесс секвенирования всего генома вируса 1918 года.

После того, как весь геном вируса 1918 года был секвенирован, появилась необходимая информация для реконструкции живой версии вируса 1918 года. Однако был необходим еще один промежуточный шаг, чтобы запустить обратный генетический процесс, который заключался в создании плазмид для каждого из восьми генных сегментов вируса 1918 года.

Эту задачу взяли на себя известные микробиологи доктор Питер Палезе и доктор Адольфо Гарсиа-Састре из Медицинской школы Маунт Синай в Нью-Йорке. Плазмида - это небольшая кольцевая цепь ДНК, которую можно амплифицировать (или реплицировать) в лаборатории. Несколькими годами ранее доктор Палезе помог первым использовать плазмиды в обратной генетике для получения жизнеспособных вирусов гриппа. Разработанные им методы позволили изучить взаимосвязь между структурой и функцией вирусных генов, и эти усилия проложили путь к методам, используемым для реконструкции вируса 1918 года. Как только доктор Палезе и его коллеги на горе Синай завершили создание плазмид, они были отправлены в CDC, чтобы можно было начать официальный процесс реконструкции.

Реконструкция

Решение восстановить самый смертоносный вирус пандемического гриппа 20-го века было принято с большой осторожностью и вниманием к безопасности. Высокопоставленные правительственные чиновники выбрали штаб-квартиру CDC в Атланте в качестве места реконструкции. Перед началом работы в лаборатории CDC провел два уровня разрешений: первый - Комитетом по институциональной биобезопасности CDC, а второй - Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию. Работа будет выполняться с использованием строгих мер предосторожности и средств биобезопасности и биозащищенности, включая так называемые методы и средства биозащищенности уровня 3 (BSL-3) с усовершенствованиями.

 

Для справки, существует четыре уровня биобезопасности, которые соответствуют степени риска, создаваемого исследованиями, при этом 1 представляет наименьший риск, а 4 - наибольший. Каждый уровень биобезопасности также соответствует конкретным лабораторным методам и методам, требованиям к обучению персонала, лабораторному оборудованию и лабораторным помещениям, которые подходят для выполняемых операций. Строгость этих требований - опять же в диапазоне от 1 как самый низкий показатель до 4 как самый высокий - разработана для защиты персонала, выполняющего работу, окружающей среды и общества.

Каждый уровень биобезопасности включает рассмотрение так называемых «первичных» и «вторичных» барьеров. Примеры первичных барьеров включают шкафы безопасности, изоляционные камеры, перчатки и халаты, тогда как вторичные барьеры включают такие факторы, как конструкция помещения и HEPA-фильтрация воздуха в лаборатории. Конкретные критерии для каждого уровня биобезопасности подробно описаны в публикации CDC / NIH « Биобезопасность в микробиологических и биомедицинских лабораториях» .

Лаборатория BSL3 с усовершенствованиями включает ряд первичных и вторичных барьеров и другие соображения. Например, весь персонал должен носить респиратор с очисткой воздуха (PAPR), двойные перчатки, скрабы, бахилы и хирургический халат. Они также должны принять душ перед выходом из лаборатории. Кроме того, вся работа с вирусом или животными должна проводиться в сертифицированном шкафу биобезопасности (BSC) класса II, а воздушный поток внутри лаборатории направленно контролируется и фильтруется, чтобы он не мог случайно покинуть лабораторию.

Для реконструкции вируса 1918 года были созданы дополнительные правила для проведения экспериментов. Например, чтобы предотвратить путаницу и перекрестное заражение, работа над вирусом 1918 года не может проводиться одновременно с работой над другими вирусами гриппа.

В рамках соображений безопасности и защиты офис директора CDC постановил, что только одному человеку будет предоставлено разрешение, доступ в лабораторию и огромная ответственность за реконструкцию вируса 1918 года. Этот человек был обученным микробиологом доктором Терренсом Тумпи, который был одобрен для участия в проекте тогдашним директором CDC, доктором Джули Гербердинг. Реконструкция вируса 1918 года также была одобрена Национальным институтом аллергии и инфекционных заболеваний (NIAID) в составе Национального института здоровья (NIH), который частично профинансировал проект.

Доктор Тампи ранее работал микробиологом Министерства сельского хозяйства США в Юго-восточной исследовательской лаборатории птицеводства в Афинах, штат Джорджия. В начале своей карьеры он подал заявку на постдокторскую стипендию Американского общества микробиологов (ASM) у микробиолога CDC и эксперта по гриппу доктора Жаклин Кац, которая недавно вышла на пенсию с должности заместителя директора отдела гриппа CDC. Эта двухлетняя стажировка в отделении гриппа CDC ознаменует начало карьеры доктора Тампи в CDC. Он официально перешел на работу в CDC с целью изучения последствий вирусов гриппа для здоровья человека, включая пандемический вирус 1918 года.

Вирус 1918 года был чрезвычайно опасен. На изображении а) показана ткань легких мыши, инфицированная вирусом сезонного гриппа человека H1N1. Изображение c) показывает воздействие вируса 1918 года на ткань легких мыши. Вирус 1918 года быстро реплицируется и вызывает тяжелые заболевания в тканях легких мышей. В 1918 году вирус вызвал тяжелое заболевание и в легких инфицированных людей. Фото: CDC, Science .

Работа доктора Тампи по воссозданию полного вируса 1918 года началась летом 2005 года. Чтобы снизить риск для коллег и общественности, он был вынужден работать с вирусом в одиночку и только в нерабочее время, когда коллеги выходили из лабораторий в течение дня и ушел домой. Для доступа в лабораторию BSL-3E требовалось биометрическое сканирование отпечатков пальцев, а морозильные камеры для хранения вирусов были доступны только через сканирование радужной оболочки его глаз. Доктор Тампи был обязан принимать предписанную профилактическую (профилактическую) суточную дозу противовирусного препарата от гриппа, осельтамивира, в качестве дополнительной меры предосторожности, чтобы предотвратить его заражение. В случае заражения ему сообщили, что он будет помещен в карантин и ему будет отказано в контактах с внешним миром. Он понял и принял эту ответственность и ее последствия.

Используя обратную генетику, доктор Тампи взял плазмиды, созданные доктором Палезе для каждого из восьми генных сегментов вируса 1918 года, и вставил их в клетки почек человека. Затем плазмиды проинструктировали клетки восстановить РНК полного вируса 1918 года. В течение нескольких недель в июле 2005 года коллеги и сотрудники спрашивали доктора Тампи, есть ли у него вирус 1918 года и появлялся ли он в культуре клеток.

В тот день, когда вирус 1918 года появился в его клеточной культуре, доктор Тампи знал, что история была сделана, и, по сути, исторический вирус был возвращен из состояния исчезновения. Позднее в тот же день он отправил коллегам и сотрудникам шутливое электронное письмо, вдохновленное Нилом Армстронгом, в котором просто говорилось: «Это один маленький шаг для человека, один гигантский скачок для человечества». Тогда все знали, что было сделано. Доктор Тампи стал первым человеком, полностью восстановившим вирус 1918 года. Следующим шагом было изучить его и раскрыть его смертельные секреты.

Лабораторные исследования реконструированного вируса 1918 года начались в августе 2005 года. Отчет об этой работе «Характеристика реконструированного пандемического вируса испанского гриппа 1918 года» был опубликован в выпуске журнала Science от 7 октября 2005 года. патогенность (т. е. способность вируса вызывать заболевание и причинять вред хозяину) были проведены исследования на животных с участием мышей. Мышей инфицировали вирусом 1918 г., и показатели заболеваемости (т.е. потеря веса, репликация вируса и титры 50% летальных доз) были собраны и задокументированы. Для сравнения, другие мыши были инфицированы разными вирусами гриппа, которые были сконструированы с помощью обратной генетики, чтобы иметь различные комбинации генов вируса 1918 года и современных вирусов сезонного гриппа человека A (H1N1). Эти вирусы называются «рекомбинантными вирусами».

 

Полностью реконструированный вирус 1918 года поражал своей способностью быстро реплицироваться, т. Е. Создавать копии самого себя и распространять инфекцию в легких инфицированных мышей. Например, через четыре дня после заражения количество вируса 1918, обнаруженного в легочной ткани инфицированных мышей, было в 39 000 раз больше, чем количество вируса, продуцируемого одним из сравниваемых рекомбинантных вирусов гриппа. ¹⁴

На левом рисунке показана репликация вируса сезонного гриппа человека под названием Tx / 91 в культуре клеток. На рисунке справа показано, как, когда ген полимеразы (PB1) этого же вируса заменяется геном вируса 1918 года, способность результирующего вируса к репликации (т. Е. Создавать копии самого себя) значительно увеличивается. Фото: Терренс Тумпи, CDC.

Кроме того, вирус 1918 г. оказался очень летальным для мышей. Некоторые мыши умерли в течение трех дней после заражения вирусом 1918 года, а мыши потеряли до 13% своей массы тела в течение двух дней после заражения вирусом 1918 года. Вирус 1918 года был по крайней мере в 100 раз более смертоносным, чем один из других протестированных рекомбинантных вирусов. ¹⁴ Эксперименты показали, что ген НА вируса 1918 года играет большую роль в его тяжести. Когда ген HA вируса 1918 года был заменен геном современного вируса сезонного гриппа человека A (H1N1), известного как «A / Texas / 36/91» или для краткости Tx / 91, и объединен с оставшимися семью генами с вирусом 1918 г. полученный рекомбинантный вирус, в частности, не убивал инфицированных мышей и не приводил к значительной потере веса. ¹⁴

Другие эксперименты были проведены, чтобы определить, может ли инфекция вирусом 1918 года распространиться на другие жизненно важные органы мышей, такие как мозг, сердце, печень и селезенку. Лабораторные испытания не обнаружили вируса в этих органах, что позволяет предположить, что вирус 1918 года не вызывал системную инфекцию у своих жертв.

Однако одним хорошо задокументированным эффектом вируса 1918 года было быстрое и серьезное повреждение легких. В 1918 году жертвы пандемического вируса испытали заполненные жидкостью легкие, а также тяжелую пневмонию и воспаление легочной ткани. В течение четырех дней после заражения мыши, инфицированные вирусом 1918 года, испытали аналогичные легочные осложнения, что позволяет предположить, что это был уникальный аспект серьезности вируса 1918 года. ¹⁴

Воздействие вируса 1918 года на ткань легких также изучалось с использованием линии клеток легких человека (известной как клетки Calu-3). Количество вируса гриппа 1918 года измеряли в клетках через 12, 16 и 24 часа после заражения, и эти результаты сравнивали с результатами, продуцируемыми рекомбинантными вирусами с комбинацией генов вируса 1918 года, смешанных с генами современных вирусов сезонного гриппа человека. Подобно экспериментам с участием мышей, вирус 1918 года быстро размножился и распространился в клетках легких человека. Настолько, что вирус 1918 года произвел в клетках легких человека в 50 раз больше вируса, чем один из вирусов сравнения. Эти эксперименты показали, что в дополнение к HA гены полимеразы вируса 1918 года играли важную роль в инфекционности и вирулентности вируса в ткани легких человека. ¹⁴

Ученый CDC «зажег» куриное яйцо, чтобы показать куриный эмбрион внутри. Фото: Джеймс Гатани - Библиотека изображений общественного здравоохранения № 10759.

изменить размер значкаПосмотреть больше

Еще одна серия экспериментов была проведена для лучшего понимания возможного птичьего происхождения вируса 1918 года. Более ранние попытки секвенирования, предпринятые доктором Таубенбергером и Рейдом, показали, что генные сегменты вируса 1918 года были более тесно связаны с вирусами птичьего гриппа A (H1N1), чем с вирусами H1N1, обнаруженными у других млекопитающих. Исследователей интересовало, будет ли вирус 1918 года смертельным для оплодотворенных куриных яиц, то есть куриных яиц, содержащих эмбрион, подобно современным высокопатогенным вирусам птичьего гриппа.

Чтобы найти ответ, 10-дневные оплодотворенные куриные яйца были заражены вирусом 1918 года. Вирус 1918 года оказался смертельным для эмбрионов куриных яиц, как и эффекты, вызываемые современными вирусами птичьего гриппа H1N1. ¹⁴ Примечательно, что сравнительные эксперименты с использованием вирусов сезонного гриппа человека A (H1N1) не оказали такого разрушительного воздействия на куриные эмбрионы. Более того, рекомбинантные вирусы гриппа, созданные доктором Тампи, содержащие два, пять или семь генов вируса 1918 года, также не повредили куриным эмбрионам. ¹⁴ Подобно результатам исследований, проведенных на мышах и клетках легких человека, эти эксперименты с оплодотворенными куриными яйцами показали, что гены HA и полимеразы вируса 1918 года, вероятно, сыграли роль в его вирулентности.

Работа, проведенная доктором Тампи и его коллегами из CDC, предоставила новую информацию о свойствах, которые способствовали вирулентности вируса 1918 года. Доктор Тампи определил, что гены вируса HA и PB1 этого вируса играют особенно важную роль в его инфекционности и серьезности. Однако, как показали его эксперименты с рекомбинантными вирусами гриппа с некоторыми, но не со всеми генами вируса 1918 года, не какой-либо отдельный компонент вируса 1918 года, а уникальная комбинация всех его генов вместе сделала его особенно опасным.

Тампи и его коллеги писали, что «совокупность всех восьми генов вместе составляет исключительно опасный вирус». ¹⁴ Никакие другие протестированные вирусы гриппа человека не были столь же вирулентными. В этом отношении вирус 1918 года был особенным - уникальным смертельным продуктом природы, эволюции и смешения людей и животных. Это послужит предзнаменованием способности природы вызывать в будущем пандемии различного происхождения и опасности для здоровья населения.

 

Уроки прошлого

 

Переполненные условия и передвижение войск во время Первой мировой войны, вероятно, способствовали распространению вируса 1918 года по всему миру. 

С 1918 года мир пережил еще три пандемии: в 1957, 1968 и совсем недавно в 2009 году. Эти последующие пандемии были менее серьезными и вызвали значительно более низкие уровни смертности, чем пандемия 1918 года. ^2,3,4 Пандемия H2N2 в 1957 году и пандемия H3N2 в 1968 году привели к примерно 1 миллиону случаев смерти во всем мире, в то время как пандемия H1N1 2009 года привела к менее чем 0,3 миллиона смертей в первый год своего существования. ^3,4 Это, возможно, вызывает вопрос о том, могла ли пандемия высокой степени тяжести в масштабе 1918 года произойти в наше время.

Так считают многие специалисты. Один вирус, в частности, привлек международное внимание и озабоченность: вирус птичьего гриппа A (H7N9) из Китая. Вирус H7N9 до сих пор вызвал в Китае 1568 случаев инфицирования людей с долей летальности около 39% с 2013 года. Однако он не получил возможности быстро и эффективно распространяться между людьми. Если бы это было так, эксперты считают, что это могло бы привести к пандемии с серьезностью, сопоставимой с пандемией 1918 года. Пока что он показал лишь ограниченную способность распространяться между людьми. Большинство случаев заражения людей этим вирусом происходит в результате контакта с птицами.

При рассмотрении потенциала современной пандемии высокой степени серьезности это важно; однако, чтобы поразмышлять о значительных достижениях в медицине, науке и обществе, произошедших с 1918 года, и при этом признать, что существует ряд способов, по которым глобальная подготовка к следующей пандемии все еще требует улучшений.

Помимо свойств самого вируса, вирулентности пандемии 1918 года способствовали многие дополнительные факторы. В 1918 году мир все еще был вовлечен в Первую мировую войну. Движение и мобилизация войск привели к тесному контакту большого количества людей, а жилые помещения были переполнены. Услуги здравоохранения были ограничены, и до 30% врачей США были направлены на военную службу. ³

Кроме того, медицинские технологии и контрмеры в то время были ограничены или отсутствовали. В то время не существовало диагностических тестов, которые могли бы проверить на инфекцию гриппа. На самом деле врачи не знали о существовании вирусов гриппа. Многие эксперты в области здравоохранения в то время думали, что пандемия 1918 года была вызвана бактерией под названием «палочка Пфайффера», которая теперь известна как Haemophilus influenzae.

Вакцины против гриппа в то время не существовало, и даже антибиотики еще не были разработаны. Например, пенициллин не был открыт до 1928 года. Точно так же не было доступных противовирусных препаратов от гриппа. Критические меры, такие как интенсивная терапия и искусственная вентиляция легких, также не были доступны в 1918 году. ⁴ Без этих медицинских контрмер и возможностей лечения у врачей оставалось мало вариантов лечения, кроме поддерживающей. ³

Что касается национального, государственного и местного планирования пандемии, то в 1918 году не существовало скоординированных планов пандемии. Некоторым городам удалось реализовать меры по смягчению последствий пандемии, такие как закрытие школ, запрет общественных собраний и выдача приказов о изоляции или карантине, но у федерального правительства не было централизованная роль в помощи в планировании или инициировании этих вмешательств во время пандемии 1918 года. ³

Сегодня значительные успехи были достигнуты в областях медицинских технологий, эпиднадзора за болезнями, медицинского обслуживания, лекарств и лекарств, вакцин и планирования пандемии. Вакцины против гриппа в настоящее время производятся и обновляются ежегодно, и ежегодная вакцинация рекомендуется всем в возрасте 6 месяцев и старше. В настоящее время существуют противовирусные препараты, которые лечат грипп, а в случае заражения вирусом также могут использоваться для профилактики (предотвращения). Важно отметить, что сейчас доступно множество различных антибиотиков, которые можно использовать для лечения вторичных бактериальных инфекций.

В настоящее время доступны диагностические тесты для выявления гриппа, и со временем они улучшаются. Современные экспресс-тесты на грипп, также известные как RIDT, дают результаты в течение 15 минут и имеют чувствительность от 50 до 70%. Недавно стали доступны новые «быстрые молекулярные анализы», которые являются своевременными и намного более точными, чем RIDT. Не менее важным, чем эти достижения в диагностических тестах, являются улучшения, которые были сделаны в лабораторных испытаниях как в Соединенных Штатах, так и во всем мире.

Глобальная система эпиднадзора за гриппом и ответных мер (ГСЭГО) Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) - это глобальная сеть эпиднадзора за гриппом, которая отслеживает изменения в сезонных вирусах гриппа, а также отслеживает появление новых (т. Е. Новых у людей) вирусов гриппа, многие из которых которые происходят из популяций животных. В результате взаимодействия с животными и людьми и воздействия окружающей среды эти вирусы могут вызывать инфекции человека. CDC в Атланте - один из шести сотрудничающих центров ВОЗ по справочным материалам и исследованиям по гриппу (наряду с другими центрами в Австралии, Китае, Японии и Соединенном Королевстве). Сотрудничающие центры ВОЗ собирают вирусы гриппа, полученные из респираторных образцов пациентов со всего мира, и им оказывают поддержку 143 национальных центра по гриппу в 114 странах-членах ВОЗ. ³

Расширение возможностей лабораторных исследований и эпиднадзора за гриппом во всем мире является важным направлением усилий по обеспечению готовности к пандемии. В 2004 году CDC начал международную инициативу по наращиванию потенциала эпиднадзора, которая повлекла за собой 5-летний период финансовой поддержки для улучшения лабораторных диагностических тестов и эпиднадзора за гриппоподобными заболеваниями (ГПЗ) и тяжелыми острыми респираторными инфекциями (ТОРИ) в 39 странах-партнерах.

В 2008 году CDC учредил Международный ресурс по реагентам (IRR), который предоставляет реагенты лабораториям по всему миру для идентификации вирусов сезонного гриппа A и B, а также новых вирусов гриппа A. Во время пандемии H1N1 2009 года IRR распространил новый ПЦР-анализ на H1N1 2009, разработанный CDC, среди местных лабораторий общественного здравоохранения и лабораторий по всему миру менее чем через 2 недели после того, как вирус H1N1 2009 был впервые идентифицирован. Это значительно расширило возможности глобального сообщества по эпиднадзору за гриппом отслеживать распространение вируса. ³

В соответствии с Международными медико-санитарными правилами (ММСП) ВОЗ страны должны уведомлять ВОЗ в течение 24 часов о любом случае инфицирования человека новым подтипом вируса гриппа А. Это требование разработано, чтобы помочь быстро идентифицировать появляющиеся вирусы с пандемическим потенциалом.

С 2010 года CDC использует свой инструмент оценки риска гриппа (IRAT) для оценки и оценки новых новых вирусов гриппа A и других вирусов, потенциально представляющих опасность для общественного здравоохранения. Оценка, предоставленная IRAT, отвечает на два вопроса: 1) Каков риск того, что вирус, который является новым для человека, может привести к устойчивой передаче от человека к человеку? и: 2) Каков потенциал существенного воздействия вируса на общественное здоровье, если он получит способность эффективно передаваться от человека к человеку? Результаты IRAT помогли экспертам в области общественного здравоохранения нацелить ресурсы готовности к пандемии на борьбу с наиболее серьезными угрозами заболеваний, а также определить приоритетность выбора вакцинных вирусов-кандидатов и разработки предпандемических вакцин против новых вирусов с наибольшим потенциалом вызвать серьезную пандемию.

Когда производятся предпандемические вакцины, они хранятся в стратегическом национальном запасе вместе с масками для лица, противовирусными препаратами и другими материалами, которые можно использовать в случае пандемии.

Все эти ресурсы, инструменты, технологии, программы и мероприятия являются отличными инструментами для планирования пандемии, а само планирование пандемии значительно улучшилось с 1918 года. В Соединенных Штатах Министерство здравоохранения и социальных служб (HHS) поддерживает национальный план борьбы с пандемией гриппа. , и этот план был обновлен в 2017 году. Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) опубликовала инструкции для стран, которые следует использовать при разработке своих национальных планов по борьбе с пандемией, а также контрольный список для управления рисками и последствиями пандемического гриппа. ³

У проектировщиков есть доступ и к другим материалам. Например, в 2014 году CDC опубликовал схему пандемии с шестью интервалами, которые попадают в пандемическую кривую. Каждый интервал помогает определить приоритетность сбора данных, государственных ресурсов и вмешательств, а также других важных мероприятий во время пандемии. Кроме того, эксперты CDC разработали систему оценки степени тяжести пандемии, в которой данные используются для определения степени серьезности и трансмиссивности пандемий. Инструмент полезен для целей планирования и определения соответствующих мер по смягчению последствий в зависимости от серьезности пандемии. Кроме того, были разработаны и пересмотрены руководящие принципы нефармацевтических вмешательств , таких как закрытие школ и крупных общественных мероприятий, для использования во время пандемии.

Хотя все эти планы, ресурсы, продукты и улучшения показывают, что с 1918 года был достигнут значительный прогресс, пробелы остаются, и серьезная пандемия все еще может иметь разрушительные последствия для населения во всем мире. В 1918 году население мира составляло 1,8 миллиарда человек. Спустя сто лет население мира выросло до 7,6 миллиарда человек в 2018 году ^3.По мере роста численности населения, поголовье свиней и птиц стало средством их прокормить. Это увеличенное количество хозяев предоставляет новые возможности для распространения, развития и заражения людей новыми вирусами гриппа птиц и свиней. Глобальное перемещение людей и товаров также увеличилось, в результате чего последней угрозой заболевания стал перелет международного самолета. Благодаря мобильности и расширению человеческих популяций даже некогда экзотические патогены, такие как Эбола, которая раньше поражала только людей, живущих в отдаленных деревнях африканских джунглей, теперь сумели проникнуть в городские районы, вызвав крупные вспышки.

Если бы серьезная пандемия, подобная той, что произошла в 1918 году, случилась сегодня, она все равно могла бы подавить инфраструктуру здравоохранения как в Соединенных Штатах, так и во всем мире. Больницам и врачебным кабинетам будет трудно удовлетворить спрос со стороны пациентов, нуждающихся в медицинской помощи. Такое мероприятие потребует значительного увеличения производства, распределения и поставок лекарств, продуктов и жизненно необходимого медицинского оборудования, такого как аппараты ИВЛ. Предприятиям и школам будет сложно функционировать, и это может повлиять даже на основные услуги, такие как вывоз мусора и вывоз мусора.

Лучшей защитой от гриппа по-прежнему является вакцина от гриппа, но даже сегодня вакцины против гриппа сталкиваются с рядом проблем. Одна из проблем заключается в том, что вакцины против гриппа часто бывают умеренно эффективными, даже если они хорошо сопоставлены с циркулирующими вирусами. Но, возможно, самая большая проблема - это время, необходимое для производства новой вакцины против появляющейся угрозы пандемии. Как правило, на выбор и изготовление новой вакцины уходит около 20 недель.

Во время пандемии H1N1 2009 г. первые дозы пандемической вакцины стали доступны только через 26 недель после принятия решения о производстве моновалентной вакцины. ³ В результате большинство прививок в Соединенных Штатах было произведено после пика болезни H1N1 в 2009 году. План HHS по борьбе с пандемическим гриппом направлен на сокращение сроков изготовления вакцины против пандемического гриппа с 20 до 12 недель, но добиться этого непросто.

Одно из возможных решений - создать вакцины с более широким защитным действием и более длительным сроком действия. Создание «универсальной вакцины» по-прежнему ускользает от ведущих ученых мира, но в будущем это может стать реальностью. Между тем, чиновники здравоохранения стремятся максимально использовать новые и существующие технологии вакцин против гриппа, такие как клеточные и рекомбинантные вакцины, которые не зависят от поставок куриных яиц, как традиционные вакцины, и могут быть произведены. Быстрее.

Еще одна проблема с вакцинами - это неадекватные глобальные возможности для массового производства вакцин против гриппа. Глобальный потенциал вакцины против пандемического гриппа оценивается в 6,4 миллиарда доз в 2015 году, но этого недостаточно, чтобы охватить даже половину населения мира, если для защиты потребуются две дозы пандемической вакцины. ³

Другие проблемы на глобальном уровне включают потенциал эпиднадзора, инфраструктуру и планирование пандемии. В большинстве стран, которые отчитываются перед ВОЗ, все еще нет национального плана по пандемии, а возможности оказания критической и клинической помощи, особенно в странах с низким уровнем дохода, по-прежнему не соответствуют требованиям тяжелой пандемии. ³ В 2005 г. в пересмотренных Международных медико-санитарных правилах (ММСП) были определены вехи для стран в целях повышения их потенциала реагирования на чрезвычайные ситуации в области общественного здравоохранения, но в 2016 г. только одна треть стран соблюдала их. ³

Все эти проблемы показывают, что необходимо проделать дополнительную работу как здесь, в Соединенных Штатах, так и на международном уровне, чтобы подготовиться к следующей пандемии. 7 мая 2018 года Школа общественного здравоохранения Роллинза при Университете Эмори в партнерстве с Центрами по контролю и профилактике заболеваний США провела однодневный симпозиум,  посвященный 100-летней годовщине пандемии гриппа 1918 года. В мероприятии приняли участие эксперты из правительства и научных кругов, которые обсудили текущие угрозы пандемии и будущее готовности к пандемии, профилактики гриппа и борьбы с ним. Присутствовавшие на встрече американские и мировые эксперты по гриппу согласились с тем, что мы все еще сталкиваемся с серьезными проблемами при подготовке к будущим пандемиям гриппа, но частью решения является признание этих проблем и совместная работа с остальным миром для их решения.

Для получения дополнительной информации о пандемии 1918 г. посетите веб-сайт CDC 1918 г. (вирус H1N1) . Для получения дополнительной информации о пандемиях гриппа см. Пандемический грипп .

 

Ссылки

1. П. Джонсон и Дж. Мюллер. Обновление отчетов: глобальная смертность от пандемии «испанского» гриппа 1918–1920 годов. Бык. Hist. Med. 2002. 76 (1): 105-115.внешний значок
2. Барбара Джестер и др. Исторические и клинические аспекты пандемии H1N1 1918 года в США. Virology 2019. 527: 32-37.внешний значок
3. Барбара Джестер и др. Готовность к реагированию на тяжелую пандемию через 100 лет после 1918 г. Am J Epidemiol. Июль 2018. 187 (12): 2596-2602. DOI: 10.1093 / aje / kwy165.внешний значок
4. Барбара Джестер и др. 100 лет медицинских контрмер и готовности к пандемическому гриппу. Am J Public Health. 2018; 108: 1469-1472. Doi: 10.2105 / AJPH.2018.304586.внешний значок
5. Журнал NYT: Зачем возрождать смертельный вирус гриппа? https://www.nytimes.com/2006/01/29/magazine/why-revive-a-deadly-flu-virus.htmlвнешний значок.
6. К. Таубенбергер, Энн Рид, Эми Краффт и др. Первоначальная генетическая характеристика «испанского вируса гриппа 1998 года». Наука . Mar 1997; Том 275, Выпуск 5307, стр 1793-1796внешний значок.
7. San Francisco Chronicle: Детектив вирусов / доктор Джон Халтин нашел доказательства эпидемии гриппа 1918 года, которые ускользали от экспертов в течение десятилетий https://www.sfgate.com/magazine/article/The-Virus-detective-Dr-John- Hultin-has-found-2872017.phpвнешний значок
8. Ann Reid et al. Происхождение и эволюция гена гемагглютинина «испанского» вируса гриппа 1918 года PNAS. Февраль 1999. Том 96. Стр. 1651–1656.внешний значок
9. Ann Reid et al. Характеристика гена нейраминидазы вируса испанского гриппа 1918 года. PNAS. Vol. 97. № 12. Июнь 2000 г. Стр. 6785-6790внешний значок.
10. Кристофер Баслер и др. «Последовательность сегмента неструктурного гена (NS) вируса пандемического гриппа 1918 г. и характеристика рекомбинантных вирусов, несущих гены NS 1918 г.» PNAS. Vol. 98. № 5. Февраль 2001 Стр. 1746-2751.внешний значок
11. Ann Reid et al. «Характеристика« испанского »сегмента гена матрицы вируса гриппа 1918 г.» Журнал вирусологии. Ноя 2002 г. 76. No. 21. С. 10717-10723.внешний значок.
12. Ann Reid et al. «Новое происхождение гена нуклеопротеина вируса пандемического гриппа 1918 г.» Журнал вирусологии. Ноябрь 2004 г. Vol. 78, No. 22. Стр. 12462-12470значок PDFвнешний значок.
13. Джеффри К. Таубенбергер и др. «Характеристика генов полимеразы вируса гриппа 1918 г.» Природа. Октябрь 2005 г. Том 437 (6). Стр. 889-893внешний значок.
14. Tumpey TM, Baster CF, Aguilar PV и др. Характеристика реконструированного пандемического вируса гриппа в Испании 1918 г. » Наука . Октябрь 2005 г. 310 (5745): 77-80.внешний значок

Связанные ресурсы

• Терренс Тумпи и др. «Существующие противовирусные препараты эффективны против вирусов гриппа с генами пандемического вируса 1918 года». PNAS. Октябрь 2002. Vol. 99. No. 21 pp. 13849-13854внешний значок.
• Терренс Тумпи и др. «Патогенность и иммуногенность вирусов гриппа с генами пандемического вируса 1918 года. PNAS. Март 2004 г. Vol. 101 No. 9. Стр. 3166-3171.внешний значок
• Гиббс М.Дж., Армстронг Дж.С., Гиббс А.Дж. и др. «Рекомбинация в гене гемагглютинина в научном исследовании« Испанский грипп »1918 года. Сентябрь 2001 г. Том 293 (5536). Стр. 1842-1845 гг.внешний значок.
• Лорел Глейзер и др. «Одна аминокислотная замена в гемагглютинине вируса гриппа 1918 г. изменяет специфичность связывания рецептора» Журнал вирусологии. Сентябрь 2005 г. Том 79. № 17. Стр. 11533-11536внешний значок.
• Эрвин Фодор и др. «Спасение вируса гриппа А от рекомбинантной ДНК» Журнал вирусологии. Ноя 1999. Том 73. № 11. Стр. 9679-9682внешний значок.
• Дарвин Кобаса и др. «Повышенная вирулентность вирусов гриппа А с гемагглютинином пандемического вируса 1918 года». Природа. Октябрь 2004. Том 431, с. 703-707.внешний значок.
• Масато Хатта и др. Наука «Молекулярная основа высокой вирулентности гонконгских вирусов гриппа A H5N1». Сентябрь 2001. Том 293. Стр. 1840-1842 гг.внешний значок.
• Питер Палезе Био - Медицинская школа Икана на горе Синай: http://labs.icahn.mssm.edu/paleselab/внешний значок

 

Последняя редакция страницы: 17 декабря 2019 г.